基于Crispr 技术的多基因敲除人源白血病小鼠模型的建立与研究

立项部门

浙江省科技厅公益技术项目（实验动物）

实施期限

2017-01至2019-12

协作单位

无

项目负责人及课题组成员

姓名

职称

工作单位

承担任务

张婷婷

副高

杭州医学院

课题设计、论文写作

谢珲

中级

杭州医学院

实验动物模型

楼琦

中级

杭州医学院

肿瘤动物造模

石巧娟

副高

杭州医学院

细胞分子生物学

钟宇森

中级

杭州医学院

生理生化分析

经费总额

   6 万元

其中

拨款

6万元

其他经费

来源及金额

无

经费预算

设备费

0万元

材料费

2.4万元

测试化验加工费

0.8万元

燃料动力费

0万元

差旅费

0.6万元

会议费

0万元

合作协作研究与交流费

0万元

劳务费

0万元

出版/文献/信息传播/知识产权事务费

0.6万元

专家咨询费

0.6万元

管理费

1.0万元

过程

信息

经费到位情况

已拨入

 6   万元

未拨入

 0    万元

实际经费使用总额

6万元

阶段性成果

完成（1）引进、繁育、鉴定、检疫最新免疫缺陷小鼠品系NSG小鼠；（2）通过X-RAY射线骨髓消融与人源造血干细胞移植，建立稳定人源免疫细胞嵌合的人源化免疫系统NSG小鼠；（3）通过优化Crispr技术效率，   完成在造血干细胞上进行的Crispr基因敲除。（4）完成将FA敲除的造血干细胞转入NSG免疫缺陷小鼠体内，构建人源FA造血干细胞重建的小鼠模型，并且初步分析人源FA-AML小鼠中，FA的病理表型。

预算支出情况

设备费

0万元

材料费

4.7万元

测试化验加工费

0万元

燃料动力费

0万元

差旅费

0.1万元

会议费

0万元

合作协作研究与交流费

0万元

劳务费

0万元

出版/文献/信息传播/知识产权事务费

0万元

专家咨询费

0.2万元

管理费

1.0万元

外协费拨出

0万元

大额设备和材料名称和价格

无

结题验收信息

获得的标志性成果

研究顺利开展和实施，已经完成（1）引进、繁育、鉴定、检疫最新免疫缺陷小鼠品系NSG小鼠；（2）通过X-RAY射线骨髓消融与人源造血干细胞移植，建立稳定人源免疫细胞嵌合的人源化免疫系统NSG小鼠；（3）通过优化Crispr技术效率，   完成在造血干细胞上进行的Crispr基因敲除。（4）完成将FA敲除的造血干细胞转入NSG免疫缺陷小鼠体内，构建人源FA造血干细胞重建的小鼠模型，并且初步分析人源FA-AML小鼠中，FA的病理表型。

研究期间发表SCI论文1篇，核心期刊论文1篇，申请专利1项。基于本研究及其相关工作获得2019年度浙江省钱江人才，2020年度浙江省卫生厅创新人才。国家自然科学基金1项，浙江省科技厅实验动物项目1项，参与合作单位国家自然科学基金1项，浙江省卫生厅项目2项。

浙江省科技计划项目《基于X射线骨髓消融技术的人源化小鼠模型构建及应用》（2017F10007）顺利结题。

参与南京大学模式动物所、Jackson实验室，实验动物模型会议3次。

培养与中医药大学联合培养硕士研究生3名（一名毕业，两名在读）。

本研究极大的提升了现有团队在转基因与人源化小鼠模型领域的研究水平。目前本研究平台的技术与设施可用于开展转基因与人源化小鼠模型的构建与表型分析相关实验。在前期研究经验和技术积累基础上，将进一步完善已有的转基因与人源化小鼠模型平台，开展自主知识产权的免疫缺陷小鼠模型、人源化小鼠模型品系开发与技术提升。

经费结算情况

项目预算经费6万元，全部为省财政经费，经浙江省医学科学院财务处经费决算，实际支出6万元，经费使用基本合理。

验收时间

2019-12

验收组织单位

受省科技厅委托，省实验动物平台办公室组织专家

验收组成员

匡荣、浙江省食品药品检验研究院、正高级

陈献花、浙江省医疗器械检验院、正高级

王德军、浙江中医药大学、副高级   乔伟伟、复旦大学、副高级

徐曙娟、浙江省林业科学研究院、副高级

结题验收意见

2019年12月30日，受省科技厅委托，省实验动物平台办公室组织专家在杭州对浙江省医学科学院承担的省公益性技术应用研究计划（实验动物）项目   “ 基于Crispr 技术的多基因敲除人源白血病小鼠模型的建立与研究”（计划编号： 2017C37135）进行验收。验收组通过听取了项目汇报，审阅了相关材料，经质询、讨论，形成如下验收意见：

1.提供的验收资料基本齐全、规范，符合验收要求。

2.该项目通过引进NSG免疫缺陷小鼠，采用X-RAY 射线骨髓消融与人源造血干细胞移植，建立稳定人源免疫细胞嵌合的人源化免疫系统NSG 小鼠。

3.通过优化CRISPR/Cas9技术效率， 在造血干细胞上进行FA基因敲除，并转入NSG 免疫缺陷小鼠体内，构建人源FA 造血干细胞重建的小鼠模型，初步分析了人源FA-AML 小鼠中FA 的病理表型。

4.发表论文2篇。

5.项目预算经费6万元，全部为省财政经费，经浙江省医学科学院财务处经费决算，实际支出6万元，经费使用基本合理。

验收组认为，该项目已经完成了合同书规定的研究内容和经济技术指标，同意通过验收。